gocheck检测前原文:
试验对重庆市万州区某养鸭专业户发病鸭分离的细菌经培养特性及生化试验,鉴定为大肠杆菌.用临床上常用的18种抗菌素纸片对分离菌株进行药敏试验,结果表明,所分离的大肠杆菌对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感,对头孢噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感,而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性.
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对应孔,50μL/孔,封板,37℃温育60min。 (4)用PBST连续洗酶标板5次,在吸水纸上甩干。再用豚鼠抗血清稀释液稀释口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清至工作浓度(1:1000),加50μL/孔,封板,37℃温育60min。 (5)用PBST连续洗酶标板5次,在吸水纸上甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物至工作浓度(1:500),加50μL/孔,封板,37℃温育60min。 (6)用PBST连续洗酶标板5次,在吸水纸上甩干。加50μL/孔底物溶液(底物溶液务必加双氧水,每1mL加10μL试剂盒配备的3%双氧水),37℃温育15min。 (7)每孔再加50μL终止液终止反应,用酶标仪读取D492nm值。 3.2.3.1.3 结果判定 (1)试验认可标准:每块板设4孔病毒抗原对照,病毒抗原对照不加任何血清,直接用PBST稀释至工作浓度(1:8),与血清/病毒抗原复合物同步加入酶标板孔,50μL/孔。病毒抗原对照D492nm值应在1.5±0.5范围内。阳性对照抗体效价在1:1024±1滴度以内,阴性对照血清抗体效价应<1:8。 (2)血清抗体效价的判定:抗原对照是4孔,弃去最高和最低D492nm值,计算剩余2孔的平均D492nm值,再除以2,即50%对照值。该值即为临界值,表示阻断50%反应的对照D492nm值。以病毒抗原对照平均D492nm值的50%为临界值,被检血清D492nm值大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔。某份血清系列稀释中,阳性孔的最高稀释倍数为被检血清的抗体效价。若临界值处于两个稀释孔D492nm值之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性
准备包被缓冲液:按规定配制碳酸盐缓冲液100 mL,4℃存放。洗涤液(PBST):用无离子水或蒸馏水配备PBST液。底物溶液:取l片柠檬酸一磷酸盐片剂溶于100 mL无离子水中.溶化后.取50 mL溶液.再加1片邻苯二胺(0PD)片剂,充分溶解。1.2.3操作步骤1.2.3.1用碳酸盐缓冲液稀释亚洲I型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:800),在ELISA板上每孔加50¨l,振荡,封板或置湿盒内,室温过夜。1.2.3.2抗原抗体反应.在U型血凝板上将待检血清从1:4开始做2倍连续稀释至1:512。然后加入亚洲I型口蹄疫病毒抗原
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