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用猪瘟胶体金快速检测试纸卡和牛病毒性腹泻(BVD)抗体ELISA试剂盒分别对50份免疫场乳牛血清和184份非免疫场牛血清进行BVD 抗体检测.结果50份免疫场牛血清阳性率分别为86%和92%,184份非免疫场牛血清阳性率分别为78.8%和82.1%,检测结果相近,说明用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体水平具有一定的参考价值.
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本文用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体。1试验材料1.1检测样品免疫群牛血清50份(由本实验室采样保存),非免疫群牛血清184份(由本实验室收集的检测样品)。1.2检测试剂猪瘟胶体金快速检测试纸卡(由福建省动物疫病预防控制中心金颜辉主持的课题组提供),牛病毒性腹泻抗体检测试剂盒(美国IDExx公司提供,批号:删一6084)。2检测方法2.1 用猪瘟胶体金快速检测 本文用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体。1试验材料1.1检测样品免疫群牛血清50份(由本实验室采样保存),非免疫群牛血清184份(由本实验室收集的检测样品)。1.2检测试剂猪瘟胶体金快速检测试纸卡(由福建省动物疫病预防控制中心金颜辉主持的课题组提供),牛病毒性腹泻抗体检测试剂盒(美国IDExx公司提供,批号:删一6084)。2检测方法2.1 用猪瘟胶体金快速检测
吸水纸上甩干,再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA板上的相对应孔,每孔509L,封板,37℃温育lh。4)同上洗板5次,甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释亚洲I型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度(1:1000),每孔加501.tL,封板,37＂C温育lh。5)同上洗板5次,甩干。用1×PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度(1:500),每孔加509L,封板,37℃温育1h。6)同上洗板5次,每孔加509L底物溶液(务必加双氧水),37℃温育15min。每孔再加501-lL终止液终止反应,立即在492nm波长下读取光吸收值(D492nm)。4.2.3.3结果判定1)试验认可标准每块板设4孔病毒抗原对照,病毒抗原对照不加任何血清,直接用PBST稀释至使用浓度,与血清／病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔,50pL／孔,病毒抗原对照D492nm值应在1.5+0.5范围内。阳性对照抗体效价应在1:1024±l滴度以内,阴性对照血清抗体效价应＜1:8。2)病毒抗原对照平均D492。m值50%计算(临界值)抗原对照是4孔,弃去最高和最低D492。mOD值,计算剩余2孔的平均D492啪值,再除以2,即50%对照值。该值即为临界值,表示阻断50%反应的对照D492nm值。3)结果判定以病毒抗原对照平均D49＂2nm值的50%为临界值,被检血清稀释孔D492舯值大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔,阳性孔的D492栅值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均D492。m值为1.2,刚其5096为0.6。若某一待检血清在1:128时D492舯值为0.6,则该份待检血清
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